羊肚菌是测多测定四大珍贵食用菌之一，因其菌盖概况有良多不法则突出且多有褶皱，评法状似羊肚而患上名，羊肚主要扩散在云南、菌中基酸贵州、种氨青海、测多测定西藏等地。评法羊肚菌肉质鲜美，羊肚风韵配合，菌中基酸营养丰硕，种氨富含卵白质、测多测定矿物资、评法多糖等物资，羊肚有后退免疫力、菌中基酸抗癌等药用价钱。种氨氨基酸作为卵白质的根基组成单元以及人体的所需营养成份，具备多种差距的心理功能，能分说食物的营养价钱，同样也分割关连以及影响食物的风韵，是食品质量评估的紧张目的，以是羊肚菌中氨基酸的含量是掂量羊肚菌品质黑白的紧张目的。 在国家尺度GB/T5009.124-2016中，测定氨基酸接管外标法，吴素蕊、张航、黄世群等对于羊肚菌氨基酸的钻研少数均接管外标法，但该措施不能消除了试验中的倾向以及尺度品与待测样品之间的基体差距所导致的基质效应，对于试验服从的精确度有确定影响；内标法由于内标物资以及待测组分来自统一基体，当试验条件爆发非酬谢变更时，两者会受到相同影响，消除了零星倾向，使合成愈加精确。为了更好地评估羊肚菌的品质，需对于羊肚菌中氨基酸的含量妨碍周全、精确的操作，但检测物资较多，老本过高且耗时过长。QAMS法经由测定一个成份而实现多个成份的同步测定，大幅度飞腾老本以及试验职员的使命量，比传统品质操作措施愈加经济、高效、重大。 本钻研接管一测多评法测定羊肚菌中17种氨基酸的含量，并对于云南、新疆、贵州等6个差距地域的羊肚菌测定钻研，本文为掂量羊肚菌的食用价钱以及品质黑白提供了迷信凭证，为羊肚菌的开拓运用指明了倾向。 1 质料与措施1.1 质料与仪器羊肚菌收集于新疆伊犁州、云南丽江市、贵州剑河县、贵州铜仁市万山区、贵州贵阳市长坡岭森林公园、贵州贵阳市乌当区长坡六个地域，羊肚菌置于干燥箱70℃烘干后，破碎捣毁处置，过60目筛，粉末密封待用；甲醇、乙腈、三乙胺、正己烷 均为色谱纯，天津科密西化学试剂有限公司；异硫氰酸酯（PITC）纯度大于98%，上海麦克林生化科技有限公司；乙酸铵、冰醋酸 均为合成纯，天津科密西化学试剂有限公司；超纯水 重价；18种氨基酸[天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、缬氨酸（Val）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、丙氨酸（Ala）、甲硫氨酸（Met）、赖氨酸（Lys）、脯氨酸（Pro）、丝氨酸（Ser）、茶氨酸（The）] 纯度均大于98%，北京世纪奥科生物技术有限公司。 1.2 试验措施1.2.1 溶液的配制1.2.1.1 内标溶液详尽称取茶氨酸，配制浓度为0.404mg/mL的内标溶液。 1.2.1.2 尺度品溶液精确称取Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys等17种氨基酸至10mL容量瓶中，加水定容患上到混标蕴藏液。移取1mL混标蕴藏液以及0.5mL内标溶液于5mL容量瓶，加水定容，患上到0.039七、0.049六、0.021八、0.020八、0.007八、0.101七、0.03十一、0.044七、0.027七、0.018二、0.020七、0.006一、0.018四、0.026三、0.0170、0.018一、0.0446mg/mL的混合氨基酸尺度溶液。 1.2.1.3 衍生化试剂衍生试剂A：取1.4mL1mol/L的三乙胺溶液至10mL容量瓶，用乙腈定容，摇匀；衍生试剂B：罗致125μLPITC至10mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，摇匀。 1.2.2 样品溶液制备与衍生化1.2.2.1 样品溶液与空缺溶液制备精确称取20mg羊肚菌于安瓿瓶中，加6.0mol/L的HCl溶液2mL，吹入氮气后密封，将其置于（105±5）℃恒温干燥箱中24h，使氨基酸残缺水解。掏出冷却后置80℃水浴挥干，一再加水挥发盐酸。加1mL蒸馏水消融，超声后患上到样品溶液。将0.5mL的内标溶液以及样品溶液移加至5mL容量瓶，加水定容，患上到样品供试溶液，期待衍生。罗致0.5mL的内标溶液加至5mL容量瓶，加水定容，无暇缺溶液。 1.2.2.2 氨基酸的衍生化详尽罗致200μL的氨基酸尺度溶液（或者样品供试溶液、空缺液）于离心管中，退出衍生试剂A、B各100μL，置40℃水浴锅中反映1h，退出400μL正己烷，振荡静置10min。取廓清的下层液，过0.45μm滤膜，即患上待测样品。 1.2.3 色谱条件分说柱为依利特HypersilODS2（5μm，250妹妹×4.6妹妹）；行动相A：0.05mol/L乙酸铵溶液（pH6.5）；行动相B：乙腈；梯度洗脱（0min，0.8%B；14min，5%B；16min，6%B；16.1min，4%B；21min，4%B；21.1min，3.5%B；30min，3.5%B；32min，8%B；40min，15%B；40.1min，16.5%B；44min，16.5%B；44.1min，20.8%B；50min，23%B；60min，25%B）；流速为1mL/min；检测波长为254nm；柱温为35℃；进样量为5μL； 1.2.4.1 线性审核精确罗致0.2五、0.五、一、二、4mL的混标蕴藏液，分说置于5mL容量瓶，再分说退出0.5mL内标溶液，加水定容，摇匀，妨碍衍生化处置，按上述的色谱进样测定。以氨基酸比力品的浓度（mg/mL）为X轴，峰面积为Y轴妨碍线性回归 1.2.4.2 相对于校对于因子的合计平行取混合尺度溶液6份，妨碍衍生化处置，按上述的色谱条件测定。以Glu为内参物，凭证相对于校对于因子（RCF，fkm）公式fkm=（Ck×Am）/（Cm×Ak），合计相对于校对于因子，式中Ck、Cm为内参物以及待测成份的浓度，Am、Ak为内参物以及待测成份的峰面积。 1.2.4.3 详尽度试验详尽罗致混合尺度品溶液，妨碍衍生化处置后按上述的色谱条件不断测定6次，记实17种氨基酸（Asp、Glu、Ser、Gly、His、Thr、Ala、Arg、Pro、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Phe、Trp、Lys）的峰面积，合计RSD值以评估仪器的详尽度。 相关链接：缬氨酸，异亮氨酸，甲硫氨酸，冰醋酸
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